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FlashPure Tissue/Cell miRNA Mini Kit
動物組織/細胞 microRNA 快速提取試劑盒（免lv仿）
動物組織/細胞microRNA快速提取試劑盒
目錄號：91409
產品內容
產品成份 | 91409-50（50 次） |
裂解液 MRL Plus | 25 ml |
Wash Solution 1 | 12 ml（需加入zhi定量無水乙chun） |
Wash Solution 2/3 | 10 ml（需加入zhi定量無水乙chun） |
RNase-Free ddH2O | 5 ml |
gDNA 過濾器和收集管 | 50 套 |
RNA 吸附柱和收集管 | 50 套 |
RNase-Free 1.5ml 離心管 | 50 支 |
RNase-Free 2.0ml 液氮研磨管 | 50 支 |
自備試劑
無水乙chun
保存條件
室溫（15 ~ 25℃）
具體產品的參數以收到產品說明書的參數為準
產品簡介
FlashPure Tissue/Cell miRNA Mini Kit（免lv仿）是通用型 microRNA快速提取試劑盒（Cat#R015）的升級版，專用于提取各種動物組織、細胞的miRNA（包含 miRNA 的總 RNA），提取過程不再需要使用lv仿，并采用du有的 gDNA 過濾器，高效濾除基因組，得到包含 miRNA 的總 RNA，可直接用于 miRNA 和 mRNA 的 RT、RT-PCR、RT-qPCR、RACE、芯片、測序等。
但是，市場上常見的離心柱型的 RNA Kit/總 RNA Kit，不能有效吸附回收 miRNA；Trizol 沉淀抽提法也不能有效沉淀回收全部 miRNA（生物通上有專題文章闡述）。
注意事項
1. 樣品應避免反復凍融，否則會影響 RNA 的提取得率和質量。
2. 樣品加入裂解液 MRL Plus 勻漿后，樣品可在–80℃保存一個月以上。
3. RNA 在裂解液 MRL Plus 中時不會被 RNase 降解，但后續處理過程中應使用不含 RNase 的吸頭和器皿。
4. 取RNA樣本時，把新鮮組織樣本浸入 RNAsafe (RNA 樣品保存液，91115-100)中，可在 37℃保存一天，在 25℃保存一周，在 4℃保存一個月，在-20℃或者–80℃長期保存。
重要提示：
① shou次使用前, 先在 Wash Solution 1、Wash Solution 2/3、70%乙chun
中加入zhi定量無水乙chun，詳見瓶上的標簽。
② 所有離心步驟均需要在室溫（15~37℃）下進行，提取效果更佳！
操作步驟
1. 動物組織：
a．電動勻漿：取新鮮組織 10~20 mg 加入 500 μl 裂解液 MRL Plus，電動勻漿，直到無明顯組織塊即可。
b．液氮研磨：液氮研磨組織成細粉，取 10~20 mg 組織細粉加入500μl 裂解液 MRL Plus，劇烈渦旋振蕩，直到無明顯粉末團即可。
c． 將裂解物 13,000 rpm 離心 3 min，沉淀不能裂解的碎片。下接操作步驟 3。
2. 細胞
a. 懸浮細胞：離心收集細胞，加 500 μl 裂解液 MRL Plus（<8x106 細胞）, 吹打混勻，劇烈渦旋振蕩20秒，充分裂解。
b. 貼壁細胞：不需要消化，吸棄培養基后，直接在培養皿中加裂解液MRL Plus（每<8x106細胞加500μl 裂解液 MRL Plus）進行消化、裂解； 或者，先用胰mei消化后離心收集細胞，然后加入裂解液 MRL Plus，吹打混勻，劇烈渦旋振蕩 20 秒，充分裂解。
c. 下接操作步驟 3。
3. 將裂解勻漿物（或離心得到的上清）全部加入 gDNA 過濾器中（過濾器放入收集管中），13,000 rpm 離心 1 min，保留濾液（RNA 在濾液中）。
4. 向濾液中加入 1.25 倍體積的無水乙chun，用移液器吹打混勻。
5. 每次轉移≤750 μl濾液混合物至RNA吸附柱中，13,000 rpm離心1min，此時，RNA 被吸附在膜上，棄濾液。重復此過程，直到溶液全部上柱。
6. 加入 700 μl Wash Solution 1（檢查是否已加入乙chun），室溫放置 1 min, 13,000 rpm 離心30sec，棄濾液。
7. 加入 500 μl Wash Solution 2/3（檢查是否已加入乙chun），13,000 rpm 離心 30 sec，棄濾液。
8. 重復步驟 7。
9. 將 RNA 吸附柱放回空收集管中，13,000 rpm 離心 2 min，除去膜上殘留的留乙chun。
10. 取出 RNA 吸附柱，放入一個新的 RNase-free 1.5 ml 離心管中，向 RNA吸附膜的中央懸空滴加 30-50 μl RNase-free H2O， 室溫放置 1 min，13,000 rpm 離心 1 min，管底即包含 miRNA 的總 RNA。
11. 得到 RNA/miRNA，可直接用于下游實驗，或于-70℃保存，以免降解。
相關產品：
71418-25 Script III miRNA 1st Stand Synthesis Kit（加尾法）
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71613-500 Script III miRNA RT-qPCR Detection kit（71418-25 + 71419-500）
附錄：
microRNA 富集方法（僅僅提取 microRNA，不包含>200 nt 其它總 RNA
成份。一般不推薦）
注意：當非特異擴增較多或者擴增背景較高時，可以嘗試使用富集方法提取的 microRNA。
1. 按照前面步驟 1、2 操作，直到得到上清或者裂解物。
2. 向上清或者裂解物中加入 0.5 倍體積的無水乙chun（必須是室溫的），吹打混勻。
3. 將全部混合液加入一個 gDNA 過濾器中， 13,000 rpm 離心 1 min，收集濾液（microRNA 在濾液中）。
此時，RNA 吸附柱的膜上是去除了 microRNA 的總 RNA（mRNA、tRNA、rRNA），如果有需要，可以按照前面標準操作步驟 6－10 操作，經漂洗、洗脫后，得到去除了 microRNA 的總 RNA。
4. 較精確估計濾液體積，加入等體積的無水乙chun（必須是室溫的），吹打混勻，不要離心。
5. 每次轉移≤750 μl濾液混合物至RNA吸附柱中，13,000 rpm離心1 min，micoRNA 被吸附在膜上，倒棄濾液。重復此過程，直到所有濾液混合物都上柱。
6. 按照前面標準操作步驟 6－10，經漂洗，洗脫后，得到 microRNA。
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