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      產(chǎn)品中心
      2× KOD PCR Master Mix(含染料)
      簡(jiǎn)要描述:

      本產(chǎn)品含紅色示蹤染料,不需添加上樣緩沖液即可直接上樣進(jìn)行電泳;也可經(jīng)過(guò)純化處理,以用于酶切、連接、測(cè)序等后續(xù)操作。
      2× KOD PCR Master Mix(含染料)

      • 產(chǎn)品型號(hào):71517
      • 廠商性質(zhì):經(jīng)銷(xiāo)商
      • 更新時(shí)間:2025-07-17
      • 訪  問(wèn)  量:304
      詳情介紹

      2× KOD PCR Master Mix (含染料)

       

      2× KOD PCR Master Mix(含染料)


      目錄號(hào):71517

      產(chǎn)品內(nèi)容

      產(chǎn)品成份

      71517-05

      71517-0100

      2× KOD PCR Master Mix

      5× 1 ml

      100× 1 ml

      保存條件

      -20℃保存,有效期 2 年。經(jīng)常使用,可置于 4 °C 保存,有效期 3 個(gè)月。


      具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)的參數(shù)為準(zhǔn)


      產(chǎn)品簡(jiǎn)介

      本產(chǎn)品包含KOD DNA Polymerase、dNTPs、MgCl2、反應(yīng)緩沖液,濃度為2×。該酶所具有的chao強(qiáng)3’→ 5’外切酶活性使得其保真性比Pfu DNA Polymerase 更高,保真性是Taq DNA Polymerase的80倍,同時(shí)具有合成速度快的特點(diǎn),聚合速度約為普通Pfu DNA Polymerase的5倍,Taq DNAPolymerase的2倍,達(dá)到100-138bp/秒,可以在短時(shí)間內(nèi)獲得高產(chǎn)量的擴(kuò)增產(chǎn)物,特別適合于高保真地?cái)U(kuò)增6kb以內(nèi)的PCR 產(chǎn)物,擴(kuò)增所得的DNA為平末端,可用于基因克隆、表達(dá)及突變分析等分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。

      KOD擴(kuò)增的PCR產(chǎn)物為平末端(Blunt),可直接用于Blunt載體克?。–at#V116、V117)

      本產(chǎn)品含紅色示蹤染料,不需添加上樣緩沖液即可直接上樣進(jìn)行電泳;也可經(jīng)過(guò)純化處理,以用于酶切、連接、測(cè)序等后續(xù)操作。

      產(chǎn)品特點(diǎn)

      1. 高產(chǎn):產(chǎn)量是普通 Taq 酶的 2 倍!

      2. 高效:延伸速度 100-138bp/sec!

      3. 高成功率:對(duì)于高 GC 模板和特殊結(jié)構(gòu)的復(fù)雜模板有良好效果!

       

      2 × KOD PCR Master Mix 使用說(shuō)明:

      一、配制 PCR 反應(yīng)體系:(于冰上配制)

      Component

      20 μl Reaction

      50 μl Reaction

      終濃度

      2× KOD PCR Master Mix

      10 μl

      25 μl

      1 ×

      Forward Primer(10 μM)

      0.4 μl

      1 μl

      0.2 μM

      Reverse Primer(10 μM)

      0.4 μl

      1 μl

      0.2 μM

      Template DNA

      <0.2 μg

      <0.5 μg

      as required

      ddH2O

      up to 20 μl

      up to 50 μl


      參考模板用量:(以 50 μl 反應(yīng)體系為例)

      質(zhì)粒:0.1-10 ng;

      細(xì)菌基因組:10-100 ng;

      人類(lèi)基因組:50-150 ng;

      cDNA:1-5 μl from RT。

      注意:用 ddH2O 補(bǔ)足反應(yīng)體系(體積)至 50 μl。實(shí)際操作中,首先要計(jì)算好需要補(bǔ)加 ddH2O 的量以后,建議先加水,然后按上述順序添加其它成分,最后添加 KOD DNA Polymerase。充分混勻后,離心數(shù)秒使反應(yīng)混合物沉到管底,然后將反應(yīng)管置于 PCR 儀中進(jìn)行擴(kuò)增。

      二、設(shè)置 PCR 循環(huán)條件:(請(qǐng)根據(jù)實(shí)際情況適當(dāng)調(diào)整)

      Step

      Temperature

      Time

      Cycle Number

      Initialdenaturation

      94℃

      3 minutes


      Denaturation

      94℃

      20-30 seconds

      30-35 cycles

      Annealing

      50-60℃

      20-30 seconds

      Extension

      72℃

      1-4kb / minute

      Final Extension

      72℃

      5 minutes



      4-8℃

      Hold


      注意:一般情況下,Annealing Temperature = Tm - 5°C

      如果擴(kuò)增片段小于 4 kb,建議 KOD 酶的延伸速度為 1kb / 15 sec;

      如果擴(kuò)增片段大于 4 kb,建議延伸速度為 1kb / 20-30 sec。

      三、結(jié)果檢測(cè):反應(yīng)結(jié)束后取 5 µl 反應(yīng)產(chǎn)物,瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)。


      2× KOD PCR Master Mix(含染料)


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